موم بتي ۽ صابڻ ٺاهڻ لاءِ خالص ساپوشنڪوويا ڊيوريڪاٽا تيل، ريڊ برنر ڊفيوزرز لاءِ نئون، ٿوڪ ڊفيوزر ضروري تيل

مختصر وضاحت:

 

2.1. ايس ڊي اي جي تياري

ايس ڊي جا ريزوم هينرب ڪمپني (گوري، ڪوريا) کان خشڪ جڙي ٻوٽي جي طور تي خريد ڪيا ويا هئا. ڪوريا انسٽيٽيوٽ آف اورينٽل ميڊيسن (KIOM) جي ڊاڪٽر گو-يا چوئي پاران ٻوٽن جي مواد جي ٽيڪسونومي طور تي تصديق ڪئي وئي. هڪ واؤچر نمونو (نمبر 2014 SDE-6) ڪورين هربيريم آف اسٽينڊرڊ هربل ريسورسز ۾ جمع ڪيو ويو. ايس ڊي (320 گرام) جا خشڪ ريزوم ٻه ڀيرا 70٪ ايٿانول (2 ڪلاڪ ريفلوڪس سان) سان ڪڍيا ويا ۽ پوءِ ان کي گهٽ دٻاءُ هيٺ مرڪوز ڪيو ويو. ڊيڪوشن کي فلٽر ڪيو ويو، لائوفيلائيز ڪيو ويو، ۽ 4°C تي ذخيرو ڪيو ويو. خام شروعاتي مواد مان خشڪ ريزوم جي پيداوار 48.13٪ (w/w) هئي.

 

2.2. مقداري اعليٰ ڪارڪردگي واري مائع ڪروميٽوگرافي (HPLC) تجزيو

ڪروميٽوگرافڪ تجزيو هڪ HPLC سسٽم (واٽرز ڪمپني، ملفورڊ، ايم اي، آمريڪا) ۽ هڪ فوٽوڊيوڊ ايري ڊيڪٽر سان ڪيو ويو. SDE جي HPLC تجزيي لاءِ، پرائمري-O-گلوڪوسائلسيميفوگين ​​معيار ڪوريا پروموشن انسٽيٽيوٽ فار ٽريڊيشنل ميڊيسن انڊسٽري (گيونگسان، ڪوريا) کان خريد ڪيو ويو، ۽سيڪنڊ-او-گلوڪوسلهاماڊول ۽ 4′-O-β-ڊي-گلوڪوسيل-5-O-ميٿيل ويسامينول کي اسان جي ليبارٽري اندر الڳ ڪيو ويو ۽ اسپيڪٽرل تجزين ذريعي سڃاڻپ ڪئي وئي، بنيادي طور تي NMR ۽ MS پاران.

ايس ڊي اي جا نمونا (0.1 ملي گرام) 70٪ ايٿانول (10 ايم ايل) ۾ حل ڪيا ويا. ڪروميٽوگرافڪ علحدگي هڪ XSelect HSS T3 C18 ڪالم (4.6 × 250 ملي ميٽر، 5) سان ڪئي وئي.μايم، واٽرز ڪمپني، ملفورڊ، ايم اي، آمريڪا). موبائل فيز ۾ ايسٽونائيٽرائيل (اي) ۽ 0.1٪ ايسٽڪ ايسڊ پاڻي (بي) ۾ 1.0 ايم ايل/منٽ جي وهڪري جي شرح تي شامل هئا. هڪ ملٽي اسٽيپ گريڊينٽ پروگرام هن ريت استعمال ڪيو ويو: 5٪ اي (0 منٽ)، 5-20٪ اي (0-10 منٽ)، 20٪ اي (10-23 منٽ)، ۽ 20-65٪ اي (23-40 منٽ). ڳولا جي طول موج 210-400 اين ايم تي اسڪين ڪئي وئي ۽ 254 اين ايم تي رڪارڊ ڪئي وئي. انجيڪشن جو مقدار 10.0 هو.μايل. ٽن ڪرومون جي تعين لاءِ معياري حل 7.781 mg/mL جي آخري ڪنسنٽريشن تي تيار ڪيا ويا (پرائم-O-گلوڪوسلسيميفوگين)، 31.125 ايم جي/ايم ايل (4'-O-β-ڊي-گلوڪوسيل-5-O-ميٿيل ويسامينول)، ۽ 31.125 ايم جي/ايم ايل (سيڪنڊ-او-گلوڪوسلهاماڊول) ميٿانول ۾ ۽ 4°C تي رکيو ويو.

2.3. سوزش مخالف سرگرمي جو جائزوويٽرو ۾

2.3.1. سيل ڪلچر ۽ نموني علاج

RAW 264.7 سيلز آمريڪي ٽائيپ ڪلچر ڪليڪشن (ATCC، Manassas، VA، USA) مان حاصل ڪيا ويا ۽ DMEM ميڊيم ۾ پوکيا ويا جن ۾ 1٪ اينٽي بايوٽڪ ۽ 5.5٪ FBS شامل هئا. سيلز کي 37 ° C تي 5٪ CO2 جي نمي واري ماحول ۾ انڪيوبيٽ ڪيو ويو. سيلز کي متحرڪ ڪرڻ لاءِ، ميڊيم کي تازي DMEM ميڊيم سان تبديل ڪيو ويو، ۽ 1 تي لپوپوليساڪرائڊ (LPS، Sigma-Aldrich ڪيميڪل ڪمپني، سينٽ لوئس، MO، USA).μايس ڊي اي جي موجودگي يا غير موجودگي ۾ g/mL شامل ڪيو ويو (200 يا 400μg/mL) اضافي 24 ڪلاڪن لاءِ.

2.3.2. نائٽرڪ آڪسائيڊ (NO)، پروسٽاگلينڊين E2 (PGE2)، ٽيومر نيڪروسس فيڪٽر جو تعين-α(ٽي اين ايف-α)، ۽ انٽرليوڪن-6 (IL-6) پيداوار

سيلز کي SDE سان علاج ڪيو ويو ۽ 24 ڪلاڪن لاءِ LPS سان متحرڪ ڪيو ويو. اڳوڻي مطالعي جي مطابق گريس ري ايجنٽ استعمال ڪندي نائيٽائٽ کي ماپڻ سان NO پيداوار جو تجزيو ڪيو ويو [12]. سوزش واري سائيٽوڪائنز جو اخراج PGE2، TNF-α، ۽ IL-6 ٺاهيندڙ جي هدايتن مطابق ELISA ڪٽ (R&D سسٽم) استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو. NO ۽ سائيٽوڪائن جي پيداوار تي SDE جا اثر 540 nm يا 450 nm تي والڪ اين ويزن استعمال ڪندي طئي ڪيا ويا.™مائڪروپليٽ ريڊر (پرڪن ايلمر).

2.4. اينٽي اوستيوآرٿرتس سرگرمي جو جائزوويو ۾

2.4.1. جانور

نر اسپراگ-ڊولي چوها (7 هفتا پراڻا) سامتاڪو انڪارپوريشن (اوسان، ڪوريا) کان خريد ڪيا ويا ۽ ڪنٽرول ٿيل حالتن ۾ 12 ڪلاڪن جي روشني/ڪارو چڪر سان رکيا ويا.°C ۽٪ نمي. چوٿين کي ليبارٽري غذا ۽ پاڻي فراهم ڪيو ويو.اشتهاري طور تيسڀ تجرباتي طريقا نيشنل انسٽيٽيوٽ آف هيلٿ (NIH) جي هدايتن جي تعميل ۾ ڪيا ويا ۽ ڊيجيون يونيورسٽي (ڊيجيون، ڪوريا جي جمهوريه) جي جانورن جي سنڀال ۽ استعمال ڪميٽي پاران منظور ڪيا ويا.

2.4.2. چوهڙن ۾ MIA سان OA جي شموليت

مطالعي جي شروعات کان اڳ جانورن کي بي ترتيب بڻايو ويو ۽ علاج گروپن ۾ مقرر ڪيو ويو (في گروپ). MIA محلول (3 mg/50)μ0.9٪ لوڻ جو L) سڌو سنئون ساڄي گوڏن جي اندروني-آرٽيڪولر اسپيس ۾ ڪيٽامين ۽ زائلازائن جي ميلاپ سان اينستيسيا جي تحت داخل ڪيو ويو. چوٿين کي بي ترتيب طور تي چار گروپن ۾ ورهايو ويو: (1) لوڻ وارو گروپ جنهن ۾ MIA انجيڪشن نه هئي، (2) MIA انجيڪشن سان MIA گروپ، (3) SDE-علاج ٿيل گروپ (200 mg/kg) MIA انجيڪشن سان، ۽ (4) انڊوميٿاسن- (IM-) علاج ٿيل گروپ (2 mg/kg) MIA انجيڪشن سان. چوٿين کي MIA انجيڪشن کان 1 هفتو اڳ 4 هفتن تائين SDE ۽ IM سان زباني طور تي ڏنو ويو. هن مطالعي ۾ استعمال ٿيندڙ SDE ۽ IM جي دوز انهن تي ٻڌل هئي جيڪي اڳئين مطالعي ۾ ملازم هئا [10،13،14].

2.4.3. ھندپا وزن کڻڻ واري ورڇ جي ماپ

OA انڊڪشن کان پوءِ، پوئين پنجي جي وزن کڻڻ جي صلاحيت ۾ اصل توازن خراب ٿي ويو. وزن کڻڻ جي برداشت ۾ تبديلين جو جائزو وٺڻ لاءِ هڪ انڪاپيسيٽينس ٽيسٽر (لنٽن انسٽرومينٽيشن، نارفولڪ، برطانيه) استعمال ڪيو ويو. چوٿون احتياط سان ماپڻ واري چيمبر ۾ رکيا ويا. پوئين عضوي پاران استعمال ڪيل وزن کڻڻ واري قوت کي 3 سيڪنڊن جي عرصي دوران اوسط ڪيو ويو. وزن جي ورڇ جو تناسب هيٺ ڏنل مساوات ذريعي ڳڻيو ويو: [ساڄي پوئين عضوي تي وزن/(ساڄي پوئين عضوي تي وزن + کاٻي پوئين عضوي تي وزن)] × 100 [15].

2.4.4. سيرم سائيٽوڪائن جي سطحن جي ماپ

رت جا نمونا 1,500 گرام تي 10 منٽن لاءِ 4°C تي سينٽرفيوج ڪيا ويا؛ پوءِ سيرم گڏ ڪيو ويو ۽ استعمال تائين -70°C تي ذخيرو ڪيو ويو. IL-1 جي سطحβ، IL-6، TNF-α، ۽ سيرم ۾ PGE2 کي ٺاهيندڙ جي هدايتن مطابق آر اينڊ ڊي سسٽم (منيپولس، ايم اين، آمريڪا) جي ELISA ڪِٽس استعمال ڪندي ماپيو ويو.

2.4.5. حقيقي وقت جي مقداري RT-PCR تجزيو

ڪُل آر اين اي کي TRI reagent® (Sigma-Aldrich، St. Louis، MO، USA) استعمال ڪندي گوڏن جي گڏيل ٽشو مان ڪڍيو ويو، cDNA ۾ ريورس ٽرانسڪرائب ڪيو ويو ۽ SYBR گرين (Applied Biosystems، Grand Island، NY، USA) سان TM One Step RT PCR ڪٽ استعمال ڪندي PCR-amplified ڪيو ويو. ريئل ٽائيم مقداري PCR اپلائيڊ بايو سسٽم 7500 ريئل ٽائيم PCR سسٽم (Applied Biosystems، Grand Island، NY، USA) استعمال ڪندي ڪيو ويو. پرائمر سيڪوئنس ۽ پروب سيڪوئنس ٽيبل ۾ ڏيکاريل آهن.1. نموني سي ڊي اين اي جي هڪجهڙائي ۽ GAPDH سي ڊي اين اي جي هڪجهڙائي مقدار کي ٺاهيندڙ جي هدايتن (اپلائيڊ بايو سسٽم، فوسٽر، سي اي، آمريڪا) مطابق ڊي اين اي پوليمريز تي مشتمل TaqMan® يونيورسل پي سي آر ماسٽر مرکب سان وڌايو ويو. پي سي آر حالتون 50 ° C تي 2 منٽ، 94 ° C تي 10 منٽ، 95 ° C تي 15 سيڪنڊ، ۽ 60 ° C تي 1 منٽ 40 چڪرن لاءِ هيون. ٺاهيندڙ جي هدايتن مطابق، ٽارگيٽ جين جي ڪنسنٽريشن کي مقابلي واري Ct (ايمپليفڪيشن پلاٽ ۽ حد جي وچ ۾ ڪراس پوائنٽ تي حد سائيڪل نمبر) طريقي سان طئي ڪيو ويو.

ايف او بي قيمت:آمريڪي ڊالر 0.5 - 9,999 / ٽڪرو

گھٽ ۾ گھٽ آرڊر مقدار:100 ٽڪرا/ٽڪرا

فراهمي جي صلاحيت:10000 ٽڪرو/ٽڪرا في مهيني