موم بتي ۽ صابن ٺاهڻ لاءِ خالص Saposhnikovia divaricata تيل، ريڊ برنر ڊفيوزر لاءِ نئون ھول سيل ڊفيوزر ضروري تيل

مختصر وضاحت:

 

2.1. SDE جي تياري

SD جا rhizomes خريد ڪيا ويا خشڪ جڙي ٻوٽي طور Hanherb Co. (گوري، ڪوريا) کان. ڪوريا انسٽيٽيوٽ آف اوريئنٽل ميڊيسن (KIOM) جي ڊاڪٽر گو-يا چوئي طرفان ٻوٽن جي مواد جي تصديق ٽيڪنيڪي طور ڪئي وئي. هڪ واؤچر جو نمونو (نمبر 2014 SDE-6) معياري هربل وسيلن جي ڪورين هربيريم ۾ جمع ڪيو ويو. SD (320 g) جي خشڪ rhizomes کي ٻه ڀيرا 70٪ ايٿانول (2 ايڇ ريفلوڪس سان) سان ڪڍيو ويو ۽ ان کي پوءِ گھٽ دٻاءَ ۾ مرڪوز ڪيو ويو. ڊيڪوشن کي فلٽر ڪيو ويو، لائوفيلائز ڪيو ويو، ۽ 4 ° C تي محفوظ ڪيو ويو. خام شروعاتي مواد مان خشڪ ڪڍڻ جي پيداوار 48.13٪ (w/w) هئي.

 

2.2. مقدار جي اعلي ڪارڪردگي مائع ڪروماتوگرافي (HPLC) تجزيو

Chromatographic تجزيو HPLC سسٽم سان ڪيو ويو (Water Co., Milford, MA, USA) ۽ هڪ photodiode array detector. SDE جي HPLC تجزيي لاءِ، پرائمري-O-glucosylcimifugin معياري خريد ڪيو ويو ڪوريا پروموشن انسٽيٽيوٽ فار روايتي دوائون انڊسٽري (گيونگسن، ڪوريا)، ۽سيڪنڊ-او-گلوڪوسلهاموڊول ۽ 4′-O-β-ڊي-گلوڪوسل-5-O-methylvisamminol اسان جي ليبارٽري جي اندر الڳ ٿيل هئا ۽ اسپيڪٽرل تجزين ذريعي سڃاڻپ ڪئي وئي، بنيادي طور تي NMR ۽ MS پاران.

SDE نموني (0.1 mg) 70٪ ethanol (10 mL) ۾ ڦهليل هئا. ڪروميٽوگرافڪ علحدگي هڪ XSelect HSS T3 C18 ڪالمن سان ڪئي وئي (4.6 × 250 ملي ايم، 5μايم، واٽر ڪمپني، ملفورڊ، ايم اي، يو ايس اي). موبائيل مرحلو 1.0 mL/min جي وهڪري جي شرح تي پاڻي (B) ۾ acetonitrile (A) ۽ 0.1% acetic acid تي مشتمل آهي. ھڪڙي گھڻائي واري درجي واري پروگرام ھيٺ ڏنل استعمال ڪيو ويو: 5٪ A (0 منٽ)، 5-20٪ A (0-10 منٽ)، 20٪ A (10-23 منٽ)، ۽ 20-65٪ A (23-40 منٽ) ). 210-400 nm تي دريافت ڪيل موج جي ڊيگهه کي اسڪين ڪيو ويو ۽ 254 nm تي رڪارڊ ڪيو ويو. انجڻ جي مقدار 10.0 هئيμL. ٽن ڪرمونز جي تعين لاءِ معياري حل 7.781 mg/mL جي آخري ڪنسنٽريشن تي تيار ڪيا ويا (prim-O-گلوڪوسيلسيمفيوگين)، 31.125 mg/mL (4′-O-β-ڊي-گلوڪوسل-5-O-ميٿيل ويسامينول)، ۽ 31.125 mg/mL (سيڪنڊ-او-glucosylhamaudol) ميٿانول ۾ ۽ 4 ° C تي رکيو ويو.

2.3. مخالف سوزش واري سرگرمي جو جائزوVitro ۾

2.3.1. سيل ڪلچر ۽ نموني علاج

RAW 264.7 سيلز آمريڪي قسم ڪلچر ڪليڪشن (ATCC، Manassas، VA، USA) مان حاصل ڪيا ويا ۽ DMEM وچولي ۾ وڌيا ويا جن ۾ 1٪ اينٽي بايوٽيڪٽس ۽ 5.5٪ FBS شامل آهن. سيلز 37 ° C تي 5٪ CO2 جي نمي واري ماحول ۾ پکڙيل هئا. سيلز کي متحرڪ ڪرڻ لاء، وچولي کي تازو DMEM وچولي سان تبديل ڪيو ويو، ۽ لپوپوليسڪرائڊ (LPS، Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1 تي.μg/mL SDE جي موجودگي يا غير موجودگي ۾ شامل ڪيو ويو (200 يا 400μg/mL) اضافي 24 ڪلاڪ لاءِ.

2.3.2. نائٽرڪ آڪسائيڊ جو تعين (NO)، Prostaglandin E2 (PGE2)، Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α)، ۽ Interleukin-6 (IL-6) پيداوار

سيلز SDE سان علاج ڪيا ويا ۽ 24 ڪلاڪ لاء LPS سان حوصلہ افزائي ڪئي وئي. NO پيداوار جو تجزيو ڪيو ويو نائيٽائٽ کي ماپڻ سان Griess reagent استعمال ڪندي گذريل مطالعي جي مطابق [12]. سوزش واري cytokines جو secretion PGE2، TNF-α، ۽ IL-6 ٺاھيندڙ جي هدايتن جي مطابق ايليسا ڪٽ (آر اينڊ ڊي سسٽم) استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو. NO ۽ cytokine جي پيداوار تي SDE جا اثر 540 nm يا 450 nm تي Wallac EnVision استعمال ڪندي طئي ڪيا ويا.™مائڪروپليٽ ريڊر (PerkinElmer).

2.4. Antiosteoarthritis سرگرمي جو جائزوVivo ۾

2.4.1. جانور

Male Sprague-Dawley rats (7 هفتا پرانا) Samtako Inc. (Osan, Korea) کان خريد ڪيا ويا ۽ 12-h روشني/اونداهي چڪر سان ڪنٽرول ٿيل حالتن ۾ رکيا ويا.°C ۽% نمي. چوڏهن کي ليبارٽري غذا ۽ پاڻي فراهم ڪيو ويواشتهار جي آزادي. سڀئي تجرباتي طريقا نيشنل انسٽيٽيوٽ آف هيلٿ (NIH) جي هدايتن جي تعميل ۾ ڪيا ويا ۽ ڊيجيون يونيورسٽي جي جانورن جي سنڀال ۽ استعمال ڪميٽي طرفان منظور ڪيا ويا (Daejeon، ڪوريا جي جمهوريه).

2.4.2. Rats ۾ MIA سان OA جي شموليت

جانورن کي بي ترتيب ڪيو ويو ۽ مطالعي جي شروعات کان اڳ علاج جي گروپن کي لڳايو ويو (في گروپ). MIA حل (3 mg/50μL جو 0.9% لوڻ) سڌو ساڄي گھٹنے جي اندر واري جاءِ ۾ داخل ڪيو ويو انيسٿيزيا جي تحت ketamine ۽ xylazine جي ميلاپ سان. چوڪن کي بي ترتيب طور تي چئن گروپن ۾ ورهايو ويو: (1) لوڻ وارو گروپ جنهن ۾ MIA انجيڪشن ناهي، (2) MIA گروپ MIA انجيڪشن سان، (3) SDE-علاج ٿيل گروپ (200 mg/kg) MIA انجيڪشن سان، ۽ (4) ) indomethacin- (IM-) علاج ٿيل گروپ (2 mg/kg) MIA انجيڪشن سان. چوٿون SDE ۽ IM سان زباني طور تي انتظام ڪيا ويا 1 هفتا اڳ MIA انجيڪشن 4 هفتا لاءِ. هن مطالعي ۾ استعمال ٿيل SDE ۽ IM جي دوائن تي ٻڌل هئي جيڪي اڳئين مطالعي ۾ ملازم هئا [10,13,14].

2.4.3. Hindpaw وزن کڻڻ واري تقسيم جي ماپ

OA جي شموليت کان پوء، وزن کڻڻ جي صلاحيت ۾ اصل توازن خراب ٿي وئي. وزن کڻڻ واري رواداري ۾ تبديلين جو جائزو وٺڻ لاءِ هڪ ناپائيداري ٽيسٽر (لنٽن اوزار، نورفولڪ، برطانيه) استعمال ڪيو ويو. چوٿون احتياط سان ماپڻ واري ڪمري ۾ رکيا ويا. پوئين عضوي طرفان وزن کڻڻ واري قوت جو اوسط 3 سيڪنڊن جي دوران ڪيو ويو. وزن جي ورڇ جو تناسب ھيٺ ڏنل مساوات جي حساب سان ڪيو ويو: [ساڄي پوئين عضون تي وزن / (ساڄي پوئين عضون تي وزن + کاٻي پاسي واري عضوي تي وزن)] × 100 [15].

2.4.4. سيرم سائٽوڪائن جي سطحن جي ماپ

رت جا نمونا 1,500 گرام تي 10 منٽ لاءِ 4 ڊگري سينٽي گريڊ تي سينٽرفيوج ڪيا ويا. پوءِ سيرم گڏ ڪيو ويو ۽ استعمال ٿيڻ تائين -70 ° C تي محفوظ ڪيو ويو. IL-1 جي سطحβIL-6، TNF-α، ۽ سيرم ۾ PGE2 ماپ ڪئي وئي ايليسا ڪٽس مان R&D سسٽم (Minneapolis, MN, USA) ٺاهيندڙن جي هدايتن مطابق.

2.4.5. حقيقي وقت مقداري RT-PCR تجزيو

ٽوٽل آر اين اي TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) استعمال ڪندي گھٹنے جي گڏيل ٽشو مان ڪڍيو ويو، سي ڊي اين اي ۽ پي سي آر-ايمپليفائيڊ ۾ TM One Step RT PCR ڪٽ استعمال ڪندي SYBR سائي (Applied Biosystems) ، گرانڊ ٻيٽ، NY، USA). ريئل ٽائيم مقداري پي سي آر استعمال ڪيو ويو اپلائيڊ بايو سسٽم 7500 ريئل ٽائيم پي سي آر سسٽم (اپلائيڊ بايو سسٽم، گرانڊ آئلينڊ، NY، USA). پرائمري جي ترتيب ۽ تحقيق جي ترتيب جدول ۾ ڏيکاريل آهي1. نموني جي سي ڊي اين ايز جا حصا ۽ GAPDH cDNA جي برابر مقدار کي TaqMan® يونيورسل پي سي آر ماسٽر مرکب سان وڌايو ويو جنهن ۾ ڊي اين اي پوليمريز شامل آهي ٺاهيندڙن جي هدايتن مطابق (اپلائيڊ بايو سسٽم، فوسٽر، CA، USA). PCR حالتون 2 منٽ 50 ° C تي، 10 منٽ 94 ° C تي، 15 s 95 ° C تي، ۽ 1 منٽ 60 ° C تي 40 چڪر لاءِ. ھدف جين جي ڪنسنٽريشن کي استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو آھي تقابلي Ct (ٿوريش ھولڊ سائيڪل نمبر تي ڪراس پوائنٽ تي ايمپليفڪيشن پلاٽ ۽ حد جي وچ ۾) طريقو، ٺاھيندڙ جي هدايتن جي مطابق.

FOB قيمت:US $0.5 - 9,999 / ٽڪرو

گھٽ ۾ گھٽ آرڊر جو مقدار:100 ٽڪرا / ٽڪرا

جي فراهمي جي صلاحيت:10000 ٽڪرو / ٽڪرو في مهيني